Contente
- Ethylenediaminetetraacetate para purificação de DNA
- Cloreto de magnésio para amplificação de DNA
- Brometo de etídio para coloração de DNA
A análise do DNA envolve diferentes tipos de experimentos moleculares e procedimentos biológicos. O DNA é uma matéria-prima frágil e complicada; portanto, seu manuseio e análise requerem a melhor qualidade e a mais pura preparação de produtos químicos. Dependendo da análise, centenas de produtos químicos, desde soluções ácidas e básicas até tampões e corantes, estão envolvidos no estudo do DNA. Entender por que alguns produtos químicos são usados é essencial para realizar experimentos bem-sucedidos e obter resultados precisos, confiáveis e reproduzíveis.
Ethylenediaminetetraacetate para purificação de DNA
Três tipos de DNA são purificados para o trabalho científico: DNA do genoma (DNA genômico), todo o DNA da célula (DNA total) ou dos plasmídeos, que podem se auto-multiplicar. A purificação total do DNA celular utiliza produtos químicos que permitem a destruição de muitas células durante a lise celular. O etilenodiaminotetraacetato químico (EDTA) é freqüentemente usado para remover íons de magnésio, necessários para manter a rigidez das paredes celulares, causando enfraquecimento ao ponto de colapsar ou rasgar, liberando o conteúdo e o DNA das células para análise. Além disso, o EDTA protege e preserva a integridade do DNA, inibindo as enzimas normalmente presentes na célula, que podem fragmentar o DNA e torná-lo inutilizável.
Cloreto de magnésio para amplificação de DNA
A reação em cadeia da polimerase (PCR) é um método sofisticado de análise usado para amplificar vários milhares de cópias de uma molécula de DNA, no entanto, está repleta de problemas técnicos e imprecisões. Muitos cientistas, portanto, realizam rotineiramente vários conjuntos diferentes de PCRs para encontrar as condições e os parâmetros mais ideais para um gene de interesse específico. Um produto químico usado para realizar essa otimização é o magnésio, que estabiliza a enzima DNA polimerase usada na PCR e atua como um co-fator essencial para a atividade da enzima. Para PCRs, o magnésio é usado na forma de um tampão de cloreto de magnésio.
Brometo de etídio para coloração de DNA
O brometo de etídio é um corante que se liga ao DNA deslizando entre os nucleotídeos que compõem uma dupla hélice do DNA em um processo conhecido como intercalação. Esse corante pode então ser iluminado com uma lâmpada ultravioleta, para que o DNA ao qual o brometo de etídio tenha sido ligado possa ser visualizado. No entanto, é necessário pelo menos 1 nanograma de DNA para que o brometo de etídio seja visto adequadamente; portanto, é uma maneira de detectar o DNA amplificado por PCR. Embora seja barato e amplamente utilizado, também é um produto químico mutagênico que causa câncer, portanto seu uso em laboratórios é altamente regulamentado e muitos cientistas estão adotando alternativas menos tóxicas.