Contente
- Diluições em série
- Preparando placas para o cálculo do título
- Contando e calculando o título de vírus
- Advertências
Calcular o título de um vírus é uma maneira complicada de dizer que um cientista está contando o número de vírus em uma amostra específica. Para calcular os títulos dos vírus, os cientistas infectam placas de bactérias em crescimento com soluções virais em concentrações variadas e calculam o número de vírus na solução original contando as bactérias que morreram devido à infecção viral.
Diluições em série
Coloque as luvas, encha 10 tubos de cultura com 9 ml de caldo e identifique-os como "10 ^ -1", "10 ^ -2", "10 ^ -3" e assim por diante até "10 ^ -10". Esses tubos será usado para diluições seriais virais usadas para calcular o título do fago. Como os vírus podem atingir concentrações incrivelmente altas, é necessário diluí-los para contá-los de maneira eficaz. Cada tubo representa uma diluição dez vezes maior do vírus.
Pegue 1 ml da cultura de vírus para a qual deseja calcular o título do fago e transfira-o para o tubo intitulado "10 ^ -1" com uma pipeta. Misture bem o tubo. Esta é sua primeira diluição dez vezes maior.
Pegue 1 ml da cultura mista do tubo rotulado como “10 ^ -1” e transfira-o com uma nova pipeta para o próximo tubo, rotulado como “10 ^ -2”. Misture também este tubo.
Continue esse padrão para criar uma série de diluições em série. Você terminará com 9 tubos de 9 ml e 1 tubo de 10 ml. As cargas virais nos seus tubos serão diluídas entre 10 vezes (seu primeiro tubo) ou 100 vezes (seu segundo tubo) a dez bilhões de vezes (seu tubo final).
Preparando placas para o cálculo do título
Pegue 10 tubos de agar macio de triptona e 10 placas de Petri e identifique-os para corresponder aos seus tubos de diluição em série.
Solte as tampas para que elas não se soltem no calor e coloque os tubos de ágar em um copo de água fervente. Isso derreterá o ágar para que você possa derramar em placas de Petri.
Transfira seus tubos para um banho de água quente definido a um mínimo de 45 graus Celsius. Isso garantirá que seu ágar não se solidifique nos tubos antes que você possa colocá-lo em uma placa de Petri.
Adicione duas gotas de cultura bacteriana ao seu ágar e misture delicadamente. Estas são as bactérias que serão mortas, permitindo que você conte o número de partículas de vírus em uma solução específica.
Adicione 1 ml de cada diluição em série ao tubo de ágar correspondente enquanto os tubos ainda estiverem no banho de água quente. Por exemplo, 1 ml da sua diluição em série 10 ^ -1 deve ir para o tubo de agar rotulado como “10 ^ -1”.
Misture cada tubo e despeje cada tubo na placa de Petri com a etiqueta correspondente. Isso criará uma fina camada de ágar que foi inoculada com bactérias e vírus em cada placa. Deixe as placas crescerem durante a noite em uma incubadora.
Contando e calculando o título de vírus
Retire os pratos da incubadora e examine-os. Você deve ver áreas nubladas em toda a placa onde as bactérias cresceram, exceto por pequenos pontos claros chamados placas. Essas placas são manchas de bactérias mortas e cada placa representa um vírus.
Encontre uma placa que tenha entre 30 e 300 placas e conte o número exato de placas nessa placa.
Pegue o número de placas no seu prato e multiplique por 10. Se você contasse 157 placas, obteria 1570.
Multiplique o número que você obteve na etapa anterior pelo inverso do número no seu tubo de diluição. Por exemplo, se a placa que você selecionou fosse a placa 10 ^ -5, você multiplicaria 1570 por 10 ^ 5 para obter 157000000. Esse número final é o título do seu fago e representa o número de vírus por ml da sua cultura original.