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Escherichia coli, E. coli, é uma bactéria que cresce no intestino inferior dos mamíferos. Essa bactéria foi descoberta pela primeira vez no final dos anos 1800. Desde então, ele tem uma longa história de uso em pesquisas científicas. É o organismo mais utilizado em genética molecular. Parte da razão pela qual a E. coli é comumente usada em pesquisas científicas é que é fácil crescer em laboratório. Os fatores que facilitam o crescimento da E. coli são suas necessidades nutricionais simples, taxa de crescimento rápido e requisitos de manutenção moderados.
Esterilize a alça de inoculação colocando-a na chama do queimador de Bunsen. Passe a metade inferior do laço pela chama até brilhar em vermelho.
Deixe o loop esfriar. Você pode tocá-lo no ágar estéril da placa para garantir que esfrie. Não coloque o laço sobre a mesa ou deixe que ele entre em contato com outra coisa que não o ágar estéril ou a cultura desejada, agora que foi esterilizado.
Mergulhe o laço na cultura de E. coli e remova-o.
Abra a placa de ágar e deslize suavemente a alça para frente e para trás na superfície de uma seção do ágar. Tome cuidado para não arranhar o ágar com o laço. O ágar fornece os nutrientes que a E. coli precisa para crescer.
Coloque o laço na chama do queimador de Bunsen novamente para esterilizá-lo. Quando a haste do loop esfriar, toque-a em uma seção estéril da placa para garantir que esteja frio e deslize o loop pela primeira raia para fazer uma segunda raia. Essa segunda sequência é uma versão diluída da primeira. Repita esse processo de esterilização e deslizamento até que várias seções da placa de ágar tenham sido deslizadas. O motivo para fazer isso é que você poderá escolher posteriormente colônias clonais únicas. Isso ajudará a garantir que você tenha pelo menos uma seção com colônias individuais - não muito concentrada (que terá muito crescimento e não permitirá que você escolha uma única colônia) e não muito diluída (o que não daria colônias) .
Esterilize o laço na chama uma última vez antes de colocá-lo de lado na área de trabalho.
Coloque o topo de volta na placa de ágar. Vire a placa de cabeça para baixo e coloque-a na incubadora ajustada para 37 graus Celsius (98,6 graus Fahrenheit). Essa temperatura ideal de incubação simula a temperatura do corpo humano onde a E. coli reside. Dentro de 24 a 48 horas, colônias visíveis da bactéria E. coli aparecerão na placa de ágar.