Contente
- Como funcionam os buffers
- Requisitos de um buffer
- Selecionando um buffer apropriado
- Como alterar o pH de um buffer
- Exemplos de tampões biológicos
Nas células e organismos vivos, os fluidos ao redor e dentro das células são mantidos em um pH constante. O pH dentro deste sistema é frequentemente crucial para as reações bioquímicas que ocorrem no organismo. Para estudar processos biológicos em laboratório, os cientistas usam tampões para manter o pH correto durante o experimento. Muitos buffers biológicos foram originalmente descritos por Good e colegas em 1966 e ainda hoje são usados em laboratórios.
Como funcionam os buffers
Um tampão é simplesmente uma solução que contém um ácido fraco e sua base conjugada. Quando um ácido é adicionado ao tampão, ele reage com a base conjugada produzindo um ácido fraco e dificilmente afetando o pH da solução.
Requisitos de um buffer
Várias características tornam um tampão biológico eficaz. Eles devem ser solúveis em água, mas não solúveis ou minimamente solúveis em solventes orgânicos. O buffer não deve ser capaz de passar pela membrana celular, pois isso pode afetar o comportamento da célula. Os tampões não devem ser tóxicos, não devem absorver a radiação UV e devem permanecer inertes e estáveis durante todo o processo experimental. A temperatura e a composição iônica não devem alterar o pH ou a capacidade de tamponamento.
Selecionando um buffer apropriado
O buffer escolhido deve ter um pKa na faixa ideal para o processo em estudo. Um tampão com um pKa mais alto é apropriado se houver probabilidade de aumento do pH durante o experimento e vice-versa, se se espera que o pH caia. As concentrações de tampão devem ser otimizadas, pois concentrações superiores a 25 mM podem ter melhor capacidade de tamponamento, mas podem inibir atividades celulares, como enzimas. O método também determina qual buffer usar; por exemplo, na eletroforese, um tampão com baixa força iônica é apropriado para impedir que a matriz de gel aqueça.
Como alterar o pH de um buffer
Como o pH pode mudar com as mudanças de temperatura, os cientistas devem testar o pH dos tampões à temperatura em que conduzirão o experimento. Tris é um tampão especialmente suscetível à mudança de pH com a temperatura. Todos os medidores de pH devem ser calibrados à temperatura de trabalho. Os aditivos também podem alterar o pH, tornando necessário o reteste. Para alterar o pH, é adicionado um ácido, geralmente ácido clorídrico ou base, geralmente hidróxido de sódio ou potássio; isso deve ser feito lentamente para evitar a inativação ou alterações químicas no buffer.
Exemplos de tampões biológicos
O tampão TE, que é 10 mM de Tris · HCl e 1 mM de EDTA, é apropriado em vários valores de pH para o armazenamento de ácidos nucleicos. A eletroforese é um método comum para o estudo de proteínas ou ácidos nucleicos; este processo utiliza um número de tampões, incluindo os tampões Tris-acetato-EDTA, Tris-glicina e Tris-borato-EDTA. Esses tampões impedem o aquecimento da matriz de gel e podem conter aditivos como uréia e SDS, dependendo da investigação.