Contente
- TL; DR (muito longo; não leu)
- O que é eletroforese?
- Preparação de gel insatisfatória
- Demasiada amostra
- Amostra de baixa qualidade
Você já se perguntou como os cientistas estudam pequenos fragmentos como o seu DNA? Um método é a eletroforese em gel. Enquanto a eletroforese geralmente produz bandas claras e fáceis de ler, perfeitas para interpretação científica, os resultados borrados às vezes obscurecem os dados.
TL; DR (muito longo; não leu)
A eletroforese em gel permite aos cientistas visualizar amostras digeridas e medir o tamanho dos fragmentos. A mancha resulta de géis de agarose inadequadamente preparados, carregando uma amostra não diluída nos poços ou usando amostras de baixa qualidade.
O que é eletroforese?
A eletroforese em gel é uma maneira para os cientistas visualizarem amostras digeridas de pequenas moléculas como o DNA e estimar o tamanho desses fragmentos. Para realizar a eletroforese, os cientistas preparam um gel suspendendo a agarose em água fervente. A polimerização resultante produz polímeros de açúcar cruzados para que o gel pareça um pouco com uma teia de aranha no nível químico.
Os cientistas usam um instrumento de corte para formar poços no gel, para que possam carregar quantidades muito pequenas de amostras digeridas nos poços. Ligar a máquina faz com que a eletricidade percorra o gel, e os fragmentos nas amostras começam a viajar dos poços para o outro lado do gel. Como o gel é semelhante a uma teia, fragmentos menores viajam através da matriz rapidamente, enquanto fragmentos maiores levam mais tempo para subir na matriz. Quando terminado, o gel contém faixas escuras representando a distância percorrida pelos diferentes fragmentos. Os cientistas medem essas bandas e usam um cálculo logarítmico para determinar o tamanho de cada fragmento com base na distância que migrou.
Os cientistas esperam por bandas claras, mas às vezes as bandas borram. Essa mancha geralmente é o resultado de géis mal preparados, carregando amostras não diluídas nos poços ou amostras de baixa qualidade.
Preparação de gel insatisfatória
Quando se trata de resultados borrados, um provável culpado é um gel mal preparado. Um gel satisfatório polimeriza uniformemente, produzindo uma matriz uniforme em todo o gel na bandeja de fundição. Se parte do gel - geralmente a metade inferior - endurecer antes que o cientista termine de servir a bandeja inteira, o gel resultante será desigual e produzirá resultados borrados.
Demasiada amostra
Antes de carregar amostras nos poços, essas amostras devem ser diluídas o suficiente para passar pelo gel sem transbordar os poços. Se uma amostra carregada estiver muito concentrada porque o cientista esqueceu de diluí-la ou usou um fator de diluição inadequado, os fragmentos serão muito grandes para os poços e produzirão manchas.
Amostra de baixa qualidade
A mancha também resulta da baixa qualidade da amostra. Por exemplo, uma amostra de DNA contaminada com proteínas ou contendo muito sal pode produzir manchas. Amostras degradadas ou desnaturadas também produzem resultados ruins, incluindo faixas manchadas.
A eletroforese em gel é uma maneira incrível para os cientistas visualizarem amostras digeridas e determinarem o tamanho do fragmento. A preparação cuidadosa do gel e da amostra minimiza a possibilidade de manchas e produz bandas claras ideais para interpretação científica.