Cientistas e técnicos geralmente precisam calcular a concentração de células em uma suspensão. Por exemplo, quando um paciente coleta seu sangue no consultório médico, o laboratório pode usar certos métodos para procurar a quantidade de glóbulos brancos em um determinado volume de sangue. Isso fornece ao médico muitas informações sobre a saúde de seu paciente, especialmente seu sistema imunológico e se ele está combatendo uma infecção ou outra doença. Testes como esse podem procurar muitas outras células no sangue, bem como o líquido espinhal e outros fluidos corporais, como a contagem de espermatozóides no sêmen para fins de fertilidade. Os cientistas também calculam as concentrações celulares de bactérias, leveduras e outros microorganismos para inúmeras finalidades, desde pesquisas ecológicas a tecnologias industriais. Uma das técnicas mais comuns também é ensinada em muitas aulas de biologia da faculdade e usa um dispositivo chamado câmara de contagem.
Antes que a suspensão de células possa entrar na câmara de contagem, ela pode precisar de diluição, pois pode conter milhares ou milhões de células. Nesse caso, as células não podem ser razoavelmente contadas. Para diluir a amostra, use uma pipeta estéril para colocar dez microlitros da solução celular em um tubo de ensaio contendo 90 microlitros de um diluente. O tipo de diluente dependerá do tipo de célula. Misture bem. Agora, essa solução é dez vezes mais diluída que a amostra inicial, portanto seu fator de diluição é 10-1. Rotule-o. Repita isso várias vezes, usando uma pipeta estéril a cada vez, até a solução estar suficientemente diluída. Se você o diluir pela segunda vez, o segundo tubo de teste será 100 vezes mais diluído que a solução inicial, portanto o fator de diluição será 10-2 e assim por diante.
Pode ser necessário tentar várias diluições para determinar o fator de diluição correto para a câmara de contagem. Uma câmara de contagem é basicamente uma caixa retangular muito pequena, clara e retangular, com uma profundidade precisa e uma grade precisa inscrita no topo. Também é conhecido como hemocitômetro ou, às vezes, hemacitômetro. O objetivo é que a suspensão seja diluída o suficiente para que, quando vista na câmara de contagem, nenhuma célula se sobreponha e elas sejam distribuídas por toda a grade de maneira uniforme. Pipete a suspensão diluída que contém as células para o poço na câmara de contagem, onde se instalará na câmara da grade por ação capilar. Coloque a câmara de contagem no palco do microscópio e visualize-a em baixa potência.
A grade contém quadrados que são feitos de quadrados ainda menores. Selecione aproximadamente quatro ou cinco quadrados, ou quantos você precisar contar pelo menos 100 células, em um padrão de sua escolha, como os quatro cantos e um quadrado central. Se as células forem grandes, esses podem ser os quadrados grandes, mas se as células forem pequenas, você poderá escolher os quadrados menores.
O volume específico de cada quadrado da grade pode variar de acordo com o fabricante da câmara, mas geralmente a profundidade da câmara é de 0,1 milímetros, a área dos quadrados grandes é de 1 milímetro quadrado e a área dos quadrados menores é de 0,04 milímetros quadrados. Os quadrados maiores, portanto, têm um volume de 0,1 milímetros em cubos. Neste exemplo, suponha que você tenha contado um total de 103 células em cinco quadrados e que tenha diluído a amostra inicial até o fator de diluição ser 10-2.
Se cada quadrado da grade tiver um volume de 0,1 milímetros cúbicos e cinco foram contados, o volume total da câmara que foi contada foi de 0,5 milímetros cúbicos e havia 103 células. Dobrar para fazer 1 milímetro cúbico seria 206 células. Um centímetro cúbico é equivalente a 1 mililitro, o que é uma medida útil para líquidos. Existem 1.000 milímetros cúbicos em um centímetro cúbico. Portanto, se houvesse um centímetro cúbico, ou um mililitro, de suspensão, você teria contado 206.000 (206 x 1.000) células. É assim que parece uma equação:
Volume do quadrado da grade × número de quadrados contados = volume total de suspensão contada
Número de células ÷ volume de suspensão contada = contagem de células por milímetros em cubos
Contagem de células por milímetro em cubos × 1000 = contagem de células por mililitro
Você precisará contabilizar qualquer diluição realizada para tornar a solução inicial contável ao microscópio. Neste exemplo, o fator de diluição é 10-2. Para calcular a concentração inicial da solução:
Contagem de células por mililitro factor fator de diluição = concentração de células
Para este exemplo, a contagem de células por mililitro é 206.000 e divide-a por 10-2 (0,01) fornece uma concentração de células de 20.600.000 células por mililitro na amostra inicial.