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A bioquímica estuda moléculas como DNA, RNA e proteínas. Técnicas de mancha são o que os cientistas usam para separar esses tipos de moléculas. Nas células, elas existem como uma mistura. O borrão permite que os pesquisadores encontrem uma proteína entre muitas, como uma agulha no palheiro. A mancha é geralmente feita deixando uma mistura de DNA, RNA ou proteína fluir através de uma placa de gel. Este gel permite que pequenas moléculas se movam mais rápido que as maiores. As moléculas separadas são então pressionadas contra uma membrana, o que ajuda a mover as moléculas do gel para a membrana. As moléculas grudam na membrana, mas permanecem no mesmo local, separadas umas das outras, como se ainda estivessem no gel.
Western Blot
Western blotting é uma técnica comum para separar proteínas por tamanho, mas em colunas retas. Essas colunas paralelas permitem que os pesquisadores comparem a quantidade de uma proteína entre diferentes amostras que são executadas próximas umas das outras, como pistas de boliche. Por exemplo, se você estivesse testando o efeito de diferentes quantidades de uma droga no crescimento celular, trataria quatro grupos diferentes de células com uma quantidade diferente de droga. Então você pode quebrar as células e executar as proteínas de cada grupo em faixas separadas em um gel. Espalhar as proteínas dessa maneira permite ver o que uma concentração crescente de drogas faz com uma determinada proteína.
Northern Blot
Northern blotting é usado para detectar RNA. As células podem ser quebradas para liberar seu RNA. O RNA de diferentes tipos de células pode ser executado em faixas separadas em um gel. O gel espalha os diferentes RNA por tamanho. Essas linhas ordenadas e paralelas de RNA permitem que um pesquisador compare qual tipo de célula possui quanto de qual RNA. Esse método permite que um pesquisador determine se as células de uma determinada doença têm mais desse RNA ou menos desse RNA. Northern blotting pode revelar como uma doença está funcionando no nível da produção de RNA.
Southern Blot
Southern blotting é a técnica original de blotting, que iniciou o sistema de nomes. Foi inventado por Edwin Southern. O Southern blot é usado para detectar a quantidade de DNA em uma mistura. Assim como as proteínas e o RNA, o DNA de uma célula pode ser liberado quando essa célula é aberta. Southern blotting separa o DNA de diferentes tipos de células por tamanho. O DNA de cada amostra é espalhado em faixas limpas e paralelas. Pedaços individuais de DNA podem ser detectados usando uma sonda radioativa ou fluorescente, projetada para se ligar apenas a esse pedaço de DNA. O sinal de energia de uma sonda radioativa, ou os flashes de luz de um sinal fluorescente, dizem aos pesquisadores quanto desse pedaço de DNA está em cada amostra.
Outras manchas
As três principais técnicas de transferência - Western, Northern e Southern - foram modificadas de diferentes maneiras para detectar moléculas ligeiramente diferentes. O Western blot vs o Southern blot, por exemplo. detecta proteínas e DNA, respectivamente. Cada técnica modificada geralmente é feita da maneira usual, mas usa um método diferente para detectar a molécula que está sendo espalhada pelas faixas paralelas. As manchas do sudoeste detectam moléculas de proteína presas ao DNA. As manchas do noroeste detectam moléculas de proteína presas ao RNA. Os borrões ocidentais detectam moléculas de proteína coladas a outras proteínas.