Contente
- O que é DNA recombinante?
- Métodos de construção de DNA recombinante
- Clonagem e uso de seqüências de DNA recombinante
O que é DNA recombinante?
DNA recombinante é uma sequência de DNA criada artificialmente em laboratório. DNA é o modelo usado pelas células para produzir as proteínas que compõem os organismos vivos, e o arranjo das bases de nitrogênio ao longo de uma cadeia de DNA determina quais proteínas são formadas. Ao isolar pedaços de DNA e recombiná-los com outras seqüências, os pesquisadores são capazes de clonar o DNA dentro de bactérias ou outras células hospedeiras e produzir proteínas úteis, como a insulina. A clonagem permite um estudo muito mais fácil de seqüências específicas de DNA, uma vez que produz uma grande quantidade de DNA que pode ser modificada e analisada.
Métodos de construção de DNA recombinante
Transformação é um processo pelo qual um segmento de DNA é inserido em um plasmídeo - um pequeno círculo de DNA auto-replicante. O DNA é cortado usando enzimas de restrição. Essas enzimas são produzidas nas células bacterianas como um mecanismo defensivo, e têm como alvo locais específicos em uma molécula de DNA e as separam. As enzimas de restrição são particularmente úteis porque criam "extremidades pegajosas" nos segmentos do DNA. Como o velcro, essas extremidades adesivas permitem que o DNA se junte facilmente a segmentos complementares.
O gene de interesse e os plasmídeos são expostos à mesma enzima de restrição. Isso cria muitas moléculas diferentes. Alguns são plasmídeos contendo o gene de interesse, alguns são plasmídeos contendo outros genes, alguns são dois plasmídeos juntos. Os plasmídeos são então reintroduzidos em células bacterianas, onde se replicam, e a molécula de DNA recombinante procurada é identificada através de diferentes tipos de análise. Por exemplo, se o plasmídeo é dividido em um gene específico, os cientistas podem procurar células que não expressam esse gene e, assim, identificar uma recombinação bem-sucedida.
A transformação não bacteriana é essencialmente o mesmo processo, mas utiliza células não bacterianas como hospedeiros. O DNA pode ser injetado diretamente no núcleo de uma célula hospedeira. Os pesquisadores também podem barrar uma célula com partículas microscópicas de metal que foram revestidas com DNA.
A transfecção é muito semelhante à transformação, mas são utilizados fagos em vez de plasmídeos. Um fago é um vírus que infecta bactérias. Tanto os fagos quanto os plasmídeos são ideais para esse processo, uma vez que se replicam rapidamente dentro de uma célula bacteriana.
Clonagem e uso de seqüências de DNA recombinante
Depois que os pesquisadores identificam as células bacterianas específicas que contêm a sequência recombinante, elas podem crescer essas células em uma cultura e gerar grandes quantidades do gene. É difícil conseguir que as células bacterianas gerem uma proteína a partir de uma célula hospedeira humana ou animal, mas existem maneiras de alterar a expressão do gene para facilitar essa produção. Se células nucleadas forem usadas como células hospedeiras (como na transformação não bacteriana), as células terão menos problemas para expressar o gene recombinante.
Uma vez que os genes são clonados em grande número, eles podem ser armazenados nas bibliotecas de DNA, sequenciados e estudados. A tecnologia de DNA recombinante permitiu muitas descobertas importantes em medicina forense, o estudo de doenças genéticas, agricultura e produtos farmacêuticos.