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Os químicos costumam usar um instrumento conhecido como espectrômetro ultravioleta visível ou UV-Vis para medir a quantidade de radiação ultravioleta e visível absorvida pelos compostos. A quantidade de radiação ultravioleta ou visível absorvida por um composto depende de três fatores: a concentração c da amostra; o comprimento do caminho, l, do suporte da amostra, que determina a distância sobre a qual a amostra e a radiação interagem; e o coeficiente de absorção molar, e, às vezes chamado de coeficiente de extinção molar. A equação é declarada como A = ecl e é conhecida como lei de Beer. A equação contém, portanto, quatro variáveis e, para determinar qualquer uma das quatro, requer valores conhecidos para três.
Cálculos
Determine a absorvância do composto no comprimento de onda desejado. Esta informação pode ser extraída do espectro de absorvância produzido por qualquer instrumento UV-Vis padrão. Os espectros são normalmente plotados como absorvância versus comprimento de onda em nanômetros. Geralmente, a aparência de quaisquer "picos" no espectro indica os comprimentos de onda de interesse.
Calcule a concentração da amostra em moles por litro, mol / L, também conhecida como molaridade, M. A equação geral da molaridade é
M = (gramas de amostra) / (peso molecular do composto) / litros de solução.
Por exemplo, uma amostra contendo 0,10 gramas de tetrafenilciclopentadienona, com um peso molecular de 384 gramas por mole, dissolvida e diluída em metanol até um volume final de 1,00 litros exibirá uma molaridade de:
M = (0,10 g) / (384 g / mol) / (1,00 L) = 0,00026 mol / L.
Determine o comprimento do caminho através do suporte de amostra. Na maioria dos casos, isso é de 1,0 cm. Outros comprimentos de caminho são possíveis, principalmente quando se lida com porta-amostras destinados a amostras gasosas. Muitos espectroscopistas incluem o comprimento do caminho com as informações da amostra no espectro de absorvância.
Calcule o coeficiente de absorção molar de acordo com a equação A = ecl, onde A é absorvância, c é a concentração em moles por litro e l é o comprimento do caminho em centímetros. Resolvida para e, essa equação se torna e = A / (cl). Continuando o exemplo da Etapa 2, a tetrafenilciclopentadienona exibe dois máximos em seu espectro de absorvância: 343 nm e 512 nm. Se o comprimento do caminho for 1,0 cm e a absorvância em 343 for 0,89, então
e (343) = A / (cl) = 0,89 / (0,00026 * 1,0) = 3423
E para a absorvância de 0,35 a 512 nm,
e (512) = 0,35 / (0,00026 * 1,0) = 1346.